-
細胞培養中細胞凋亡的可能原因及解決方法
答:可能是由于培養條件不適、基因突變、藥物作用等原因引起的。
解決方法:
1、優化培養條件,如調整溫度、pH值、氣體比例等;
2、觀察細胞形態和生長情況,及時發現凋亡跡象;
3、對于凋亡嚴重的細胞株,可以嘗試進行基因檢測和藥物篩選,以找到引起凋亡的原因。
牛血清是細胞培養中用量大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用于動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能:
(1)提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。
(2)提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
(3)有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
(4)是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。
(5)起酸堿度緩沖液作用。
(6)提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
(7)超級血清能兼容市面上基本上所有細胞,尤其是難養的干細胞;超級能兼容90%以上細胞;
根據牛出生時間和血清采制分離方法,血清一般分為胎牛血清、新生牛血清和小牛血清。胎牛血清為八月齡胎牛心臟穿刺取血再經熱滅活、透析、過濾除菌后制成。本產品為特級胎牛血清,經過0.1 μm過濾除菌,低溫緩慢解凍后即可使用。適用于干細胞、昆蟲細胞、原代體細胞、傳代體細胞、基因改造細胞、腫瘤細胞、異倍體細胞等細胞的培養與保存。
1. 解凍:溫和的升溫過程可有效減少沉淀的產生,不推薦直接高溫解凍血清。
1)將凍存的血清移到2-8℃的冰箱中,過夜解凍;
2)或者將血清移至37℃水浴中,間歇性搖晃混勻底部的溶解物,直至全部溶解。
2. 基礎培養基中胎牛血清的使用濃度一般為5-20%,根據細胞種類及實驗需求按比例添加。
1. 避免反復凍融。血清解凍后,可在2-8℃條件下儲存6周。如解凍后的血清儲存時間需要大于6周,建議分裝成合適的體積并重新凍存。
2. 如血清中含有大量的沉淀,不建議直接過濾血清。如有過濾需求,可將血清分裝至無菌離心管中,稍微離心,取上清液直接加入培養基內混合后再過濾。
3. 若血清沒有混勻且放置于高于40℃的水浴中,底部的蛋白會變性形成沉淀。
4. 使用時注意無菌操作,防止細菌污染。
5. 操作時請穿實驗服,佩戴一次性手套。
更新中...
答:可能是由于培養條件不適、基因突變、藥物作用等原因引起的。
解決方法:
1、優化培養條件,如調整溫度、pH值、氣體比例等;
2、觀察細胞形態和生長情況,及時發現凋亡跡象;
3、對于凋亡嚴重的細胞株,可以嘗試進行基因檢測和藥物篩選,以找到引起凋亡的原因。
Copyright ?湖北普美生物科技有限公司 All Rights Reserved. 工信部備案:鄂ICP備17001029號-1 技術支持:武漢微盟