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血清沉淀增多的原因及解決方法
由于在37℃的溫度下培養,會加劇纖維蛋白的析出和磷酸鈣顆粒產生,可采用空培方式驗證污染,血清按所需比例加入無菌培養基中(不加雙抗),放培養箱中過夜,觀察空培外觀,若為澄清,則血清無污染。還可以通過將血清接種在細菌培養基上進行培養,觀察是否存在細菌增殖,并且進行革蘭氏染色,用油鏡觀察直接判斷是否為微生物污染。
血清中產生沉淀原因可能是:
① 血清熱滅活;② 37℃ 孵育;③ 頻繁的解凍與凍存操作;④ 解凍過程中未混合;⑤ 經γ-輻照;⑥ 2-8℃ 長時間儲存;如果血清中含有沉淀,
若去除這些絮狀沉淀物,可將血清分裝至無菌離心管中,以3000rpm離心5-15min,去除大顆粒沉淀,收集上清液加入培養基內一起過濾。
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如何做血清的梯度替換?
當細胞培養實驗需更換血清品牌時,做程序性梯度替換方案尤為重要,因為不同品牌的血清所含成分有所差異,血清更換會使細胞發生不適,從而出現細胞增殖緩慢或細胞狀態不佳等情況。
血清梯度替換過程如下:
(1)用20%新血清與80%原血清進行混合,培養傳代1-2次;
(2)用50%新血清與50%原血清混合培養傳代;
(3)再用80%新血清與20%原血清混合培養傳代;
(4)完全使用新血清培養傳代。