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親脂性熒光染料PKH67(Green)和PKH26(Red) 適用于常規細胞膜標記。熒光染料PKH67 是一種可對體外和體內細胞示蹤的綠色熒光染料，通過與膜結構的脂質分子結合而標記細胞。PKH67對細胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，有著強而穩定的綠色熒光。經PKH67標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。在細胞分裂增殖過程中，PKH67 的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配于兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據這一特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。PKH67標記細胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，PKH67標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變為親代細胞的一半，通過流式細胞儀根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次(1/2 的熒光強度)，二次(1/4 的熒光強度)，三次(1/8的熒光強度)，以及更多分裂次數的細胞。PKH67 可檢測分裂次數多達六次甚至更多。除了用于細胞增殖檢測，PKH67 還可以用于細胞的體外盒體內示蹤，標記后熒光在胞內表達穩定，陽性標記率達98%以上，標記細胞形態良好，能有效地觀察細胞在體外的誘導分化情況；或將標記的細胞注于體內，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。PKH67標記的細胞用于體內觀察可以長達數周之久，它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗。PKH67 毒性較小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患。可以更快速，更準確和更安全地得到想要的實驗數據。

由于炭尾長度更長，內部研究已經證明PKH67比PKH2由更少的細胞間轉移。在采用PKH1和PKH2進行的體內研究中，熒光強度都會緩慢損失。由于這是綠色細胞linker染料而非紅色細胞linker染料出現的行為特征，因而PKH67會出現類似的性質。不分裂細胞的體外細胞膜留存和體內熒光半衰期的關聯性揭示，PKH67的體內熒光半衰期為10-12天。其他具有類似半衰期的綠色細胞linker染料已經被用于監測1-2月內的體內 淋巴細胞和巨噬細胞運輸，結果表明PKH67還可用于中等時長的體內跟蹤研究。

染料可以穩定的與細胞膜脂質區結合并發出熒光，主要用于細胞體外標記、體外細胞增殖研究以及體內外的細胞示蹤研究。PKH67的體內熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內細胞跟蹤研究。PKH67標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。

（1）從冰箱中取出PKH67試劑，靜置幾分鐘至室溫，或者37℃水浴片刻后，離心盛放PKH67 的管子，開蓋前請務必離心幾分鐘讓試劑充分落入管底后才能開蓋。

（2）根據需要檢測的細胞樣品數，用稀釋液將探針10倍稀釋，再用合適的溶液(如：無血清培養基，HBSS或PBS)將PKH67母液25倍稀釋，配制成染色工作液。佳工作液濃度請根據不同細胞和自身的實驗體系來調整。一般細胞使用按試劑盒中的母液的終濃度250倍稀釋即可，有些細胞可能需要適當增加濃度。

2. 細胞染色

（1）將制備好的待測細胞用100μl染色工作液重懸，至細胞濃度大約10⁷/ml。也可以進行原位染色，染色液足夠覆蓋細胞即可。

（2）在2～8 ℃培養細胞 15～30分鐘，不同的細胞佳培養時間不同。

建議待標記細胞在染色工作液中于37℃孵育5min，再于4℃孵育15min。

低溫孵育可降低細胞對染料的內吞作用用，有助于染料對質膜的標記，并且降低染料定位細胞質囊泡的可能性。

（3）離心后去上清，收集細胞，用PBS或無血清培養基洗滌細胞1-2次，后加入PBS或無血清培養基重懸細胞。

（4）取500μl 細胞懸液，用流式細胞儀檢測。Ex/Em=490/502nm。

（5）隨后還可按照細胞的正常培養方法進行培養。

可以在熒光顯微鏡下直接觀察標記效果，也可以在培養適當時間后再用流式細胞儀檢測細胞增殖，或用于其他特定實驗目的的細胞熒光示蹤。