細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(Cell?Cycle?and?Apoptosis?Analysis?Kit)是一種采用經典的碘化丙啶染色(Propidium Iodide?staining)方法進行細胞周期與細胞凋亡分析。
碘化丙啶(Propidium Iodide,簡稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結合后可以產生熒光,并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定,然后根據DNA含量的分布情況,可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后,假設G0/G1期細胞的熒光強度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2,正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發生濃縮以及發生DNA片段化(DNA?fragmentation)導致部分基因組DNA片段在染色過程中丟失,因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現明顯的弱染,即熒光強度小于1,在流式檢測的熒光圖上出現所謂的sub-G1峰,即凋亡細胞峰。
細胞發生凋亡時,由于胞漿和染色質濃縮、核碎裂,產生凋亡小體,使細胞的光散射性質發生變化。在細胞凋亡的早期,細胞對前向角光散射的能力顯著降低,對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期,前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
本試劑盒通常應用于培養的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測,則必須把組織消化成單細胞狀態,才可以進行檢測。
本試劑盒足夠檢測50個樣品,每個樣品的細胞數量可以為10-100萬。
1)本試劑盒需要使用流式細胞儀進行檢測。需自備PBS和70%乙醇。
2)細胞處理需輕柔,盡量避免人為的損傷細胞。
3)為防止不同批次細胞在實驗時所處周期不同導致重復性差,可以在實驗前進行細胞的同步化處理。實驗細胞應處于對數生長期,貼壁細胞一般在50~80%匯合度時收集為宜。
4)400目篩網過濾是用來將粘在一起的細胞團濾掉,留下單細胞,否則會出現人為的多倍體干擾。如果沒有條件過濾,請在染色之前將細胞輕彈以分散,再進行染色。
5)熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
6)碘化丙啶對人體有刺激性,操作碘化丙啶時,應注意防護,保護眼睛、避免吸入。
7)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
8)本試劑盒僅用于實驗室科學研究,如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途,我們將不對任何后果負責。
更新中...
答:可能是由于培養條件不適、基因突變、藥物作用等原因引起的。
解決方法:
1、優化培養條件,如調整溫度、pH值、氣體比例等;
2、觀察細胞形態和生長情況,及時發現凋亡跡象;
3、對于凋亡嚴重的細胞株,可以嘗試進行基因檢測和藥物篩選,以找到引起凋亡的原因。
Copyright ?湖北普美生物科技有限公司 All Rights Reserved. 工信部備案:鄂ICP備17001029號-1 技術支持:武漢微盟