細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)， 會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA，產(chǎn)生180bp-200bp的 DNA 片段，表現(xiàn)為瓊脂糖凝膠電泳中呈現(xiàn)的特異的梯狀Ladder圖譜。基因組DNA雙鏈或單鏈斷裂時(shí)會出現(xiàn)產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化作用下，與SuperFlour-dUTP結(jié)合，從而通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀直接進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(Terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。Tunel法可以對完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色，能準(zhǔn)確地反應(yīng)細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征，可檢測出極少量的凋亡細(xì)胞，因而在細(xì)胞凋亡的研究中廣泛采用。
本試劑盒應(yīng)用范圍廣，可用于檢測冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可檢測培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。可選擇性的檢測凋亡細(xì)胞，而非壞死細(xì)胞或因輻照和藥物治療而造成的 DNA 鏈斷裂的細(xì)胞。本試劑盒檢測細(xì)胞凋亡，耗時(shí)短，只需一步染色反應(yīng)，洗滌后即可檢測。
PBS 緩沖液(pH~7.4)；4%多聚甲醛；牛血清白蛋白 (BSA) 或正常的羊、牛血清；70%乙醇(自選)；脫蠟溶劑(石蠟切片樣本)
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答：細(xì)胞形態(tài)異常可能是由于支原體污染、有毒物質(zhì)釋放、營養(yǎng)不足等原因引起的。
解決方法有：
1、定期進(jìn)行支原體檢測，確保細(xì)胞無支原體污染；
2、檢查培養(yǎng)基和血清的質(zhì)量，避免使用過期或劣質(zhì)的試劑；
3、觀察細(xì)胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)采取措施，如更換培養(yǎng)基或使用相應(yīng)的藥物處理；
4、對于有毒物質(zhì)釋放引起的形態(tài)異常，可以嘗試降低細(xì)胞密度或更換培養(yǎng)基。
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