細胞在發生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA,造成細胞染色體 DNA的降解。這種降解非常特異并有規律,所產生不同長度的 DNA 片段約為180bp-200bp的整數倍,表現為瓊脂糖凝膠電泳中呈現特異的梯狀Ladder圖譜。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發現180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色熒光探針(SF488)標記的dUTP(fluorescein-dUTP),這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。488-dUTP 標記的DNA可以用熒光顯微鏡直接觀察或者用流式細胞儀定量。TUNEL 法可以選擇性的檢測凋亡細胞,而非壞死細胞或因輻照和藥物治療而造成DNA鏈斷裂的細胞。TUNEL實驗中,TdT酶催化dUTP摻入斷裂的DNA鏈的3′-OH 末端。抗原標記dUTP(如digoxin-dUTP、生物素-dUTP),因為它可以直接進行原位檢測,是一種更快速、直接的檢測手段。
PBS 緩沖液(pH~7.4);4%多聚甲醛;牛血清白蛋白 (BSA) 或正常的羊、牛血清;70%乙醇(自選);脫蠟溶劑(石蠟切片樣本)
1) 熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
2) TUNEL Equilibration Buffer 和 TUNEL Reaction Buffer 中含有 Sodium cacodylate trihydrate 和Cobaltous chloride,使用時請佩戴口罩、手套,接觸皮膚后, 請立即有大量水沖洗,廢液請按有毒物質處理。
3) 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
4) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:細胞形態異常可能是由于支原體污染、有毒物質釋放、營養不足等原因引起的。
解決方法有:
1、定期進行支原體檢測,確保細胞無支原體污染;
2、檢查培養基和血清的質量,避免使用過期或劣質的試劑;
3、觀察細胞形態,發現異常及時采取措施,如更換培養基或使用相應的藥物處理;
4、對于有毒物質釋放引起的形態異常,可以嘗試降低細胞密度或更換培養基。
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