線粒體是真核細胞產生能量的場所,具有雙層膜結構,包括線粒體外膜以及折疊的內膜。在完整線粒體內膜上有一個電壓梯度即膜電位,外正內負。線粒體跨膜電位破壞是細胞凋亡發生后早發生的細胞內變化之一。本試劑盒可用于檢測線粒體跨膜電位的變化,為鑒別正常細胞和凋亡細胞提供了一種簡便的方法。原理是基于JC-1線粒體熒光探針,在線粒體膜電位較高時,JC-1線粒體熒光探針聚集在線粒體的基質(matrix)中,形成聚合物(J-aggregates),可以產生紅色熒光(Ex/Em= 585/590);在線粒體膜電位較低時,JC-1線粒體熒光探針不能聚集在線粒體的基質中,此時JC-1線粒體熒光探針為單體(monomer),可以產生綠色熒光(Ex/Em= 510/527nm)。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。JC-1線粒體熒光探針可以作為多種細胞的線粒體膜電位指標,包括肌細胞和神經元,以及完整的組織或分離的線粒體。本試劑盒包含CCCP,它能使質子梯度解偶聯,可作為誘導線粒體膜電位下降的陽性對照。
熒光顯微鏡或流式細胞儀
細胞培養板、可調節式移液槍及槍頭
離心機、37℃,5% CO2細胞培養箱
超純水
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答:可能是由于培養條件不適、基因突變、藥物作用等原因引起的。
解決方法:
1、優化培養條件,如調整溫度、pH值、氣體比例等;
2、觀察細胞形態和生長情況,及時發現凋亡跡象;
3、對于凋亡嚴重的細胞株,可以嘗試進行基因檢測和藥物篩選,以找到引起凋亡的原因。
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