Calcein AM是在Calcein (鈣黃綠素)的基礎上增加了乙酰氧基甲酯(AM)基團,加強了疏水性,因此能夠很容易穿透活細胞膜,進入細胞內,從而標記細胞。Calcein AM本身并無熒光,進入細胞后被細胞中內源性酯酶水解生成具有強負電荷的不能通透細胞膜的極性分子鈣黃綠素(Calcein),從而被滯留在細胞內,而Calcein可發出強綠色熒光。由于死細胞缺乏酯酶,Calcein AM進入細胞后僅活細胞會被染色為綠色熒光,所以可對活細胞進行定量熒光檢測。與其它同類探針相比,由于Calcein AM的細胞毒性非常低,幾乎不會影響細胞功能如細胞增殖或淋巴細胞的趨化性等,而且對pH值敏感性低,所以Calcein AM是目前活細胞熒光染色的理想探針之一。近年來Calcein AM也被廣泛用于細胞活性、細胞毒性或細胞增殖的檢測。Calcein AM細胞活性檢測試劑盒是一種通過Calcein-AM熒光探針標記活細胞從而簡單、快速、靈敏、準確地用于細胞活性、細胞毒性或細胞增殖檢測的試劑盒。本試劑盒由于能用于活細胞的精確定量,也被稱為細胞熒光計數試劑盒(Cell Fluorescence Counting Kit),簡稱Cell Fluorescence Counting Kit-F、CCK-F或CCKF。本試劑盒通常推薦使用熒光酶標儀進行定量檢測,也可以使用流式細胞儀進行定量檢測。如果有必要,也可以使用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進行細胞的熒光檢測。
熒光酶標儀或流式細胞儀或熒光顯微鏡、離心機
細胞培養板、可調節式移液槍及槍頭
去離子水、PBS
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答:可能的原因包括培養基質量、血清質量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有:
1. 使用高質量的培養基和血清,確保其無菌、無支原體污染,并保證在保質期內使用;
2. 培養箱溫度和氣體比例要保持穩定,定期校準;
3. 每天檢查并記錄細胞培養的環境參數,如溫度、pH值、氣體比例等,以便及時發現問題;
4. 定期更換培養基,保持細胞營養充足;
5. 對于生長緩慢的細胞株,可以嘗試進行克隆篩選或更換培養基。
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