DNA Loading Buffer 和蛋白 Loading Buffer 都是生物學中常用的上樣緩沖液,不少同學常常將它們弄混,今天給大家詳細講解一下DNA Loading Buffer 和蛋白 Loading Buffer 的區別。
用途
1.DNA Loading Buffer: 用于瓊脂糖凝膠電泳,與DNA樣品混合后可直接點樣。 2.蛋白 Loading Buffer: 用于聚丙烯酰胺凝膠電泳,與蛋白樣品混合后需要煮沸才可點樣。 成分及作用
1 DAN Loading Buffer DNA Loading Buffer的主要成分為溴酚藍、二甲苯氰、甘油、EDTA。 (1) 溴酚藍和二甲苯氰都可以作為指示劑,便于觀察樣品是否跑出凝膠,從而及時結束電泳。(注:在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中,溴酚蘭的遷移分別與1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA片段大致相同;二甲苯氰在1%和1.4%瓊脂糖中電泳時,其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大致相似。) (2) 甘油可以增加樣品的密度,使樣品密度大于TAE電泳緩沖液,從而沉降到點樣孔的底部,便于點樣。 (3) SDS使DNA聚合酶變性,從而和DNA解離,避免DNA聚合酶與DNA結合減緩DNA的遷移率。 (4)EDTA可以能夠與各種金屬陽離子形成高度穩定的水溶性絡合物,防止DNA降解。 2 蛋白 Loading Buffer 蛋白 Loading Buffer的主要成分為:Tris-HCl(pH6.8)、SDS、甘油、β-巰基乙醇、溴酚藍。 (1) Tris-HCl:維持pH穩定。 (2) 溴酚藍起到指示劑的作用,同時溴酚藍也是pH指示劑,在pH 3.0~4.6范圍,顏色由黃變藍。 (3) SDS能夠結合蛋白質,使各種蛋白質—SDS復合物帶有等量的負電荷,掩蓋了不同種蛋白質間原有的電荷差別,從而使蛋白能夠在電場的作用下向同一方向遷移。 (4) 甘油的作用也是增加樣品的密度,使樣品沉入點樣孔中。 (5) β-巰基乙醇是常用的強還原劑,能夠破壞蛋白質的二硫鍵,使蛋白質結構線性化。蛋白質的遷移率只受到其分子量的影響,分子量越大,遷移越慢。 總結
DNA Loading Buffer 用于DNA電泳,成分簡單,主要增加密度和指示進程。蛋白 Loading Buffer 用于蛋白質電泳,成分復雜,包含變性劑和還原劑,確保蛋白質線性化和帶負電。兩者不可互換,需根據實驗類型選擇。大家能否正確區分呢?