本品為即用型1 × , 主要針對多因子實驗(CBA\Luminex\MSD) 的組織和細胞樣本進行裂解作用,其中不包含SDS和NP40等去垢劑成分,有效提高檢出效率。
NaCl 、Tris(pH=7. 5) 、EDTA 、EGTA和Triton-X- 100
1 、組織樣本:每10mg加入100ul本品進行裂解針對組織。
利用組織處理器或者其他組織處理裝置,處理樣本,保證樣本處理完全。
2 、細胞樣本:每107細胞加入200ul本品進行裂解,4℃靜置20-30min。
3 、將裂解收的樣品10000 - 14000rpm ,4℃離心10min ,取上清(建議組織裂解液離心兩次)。
4 、取上清做BCA總蛋白濃度測定,完成后續操作。
1.本產品僅供科研使用,請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途
2.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大?。?/p>
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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