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胞質蛋白提取試劑盒
貨號:PMK0093
一鍵復制產品信息
價格:
600.00
規格:
50T
100T
貨期:
現貨
Details
產品詳情
  • 產品簡介

    本試劑盒用于從哺乳動物組織和培養細胞中提取胞質蛋白,用裂解液勻漿裂解組織或細胞 ,作用溫和,提取過程簡便高效,可快速獲得胞質蛋白。 獲得的總蛋白可用于報告基因檢測、蛋白質純化、Western Blot、免疫共沉淀等后續研究 ,但不能用于蛋白激酶及磷酸酶的研究 ,因本試劑盒中包括這兩種酶的抑制劑。

  • 產品內容

    image.png

  • 使用方法

    組織胞質蛋白的提取
    1.提取液的用量和配制:每0.1g組織需要0.75-1ml胞質蛋白提取液;每1ml冷的胞質蛋白提取液中加入20ul磷酸酶抑制劑混合物、10ul蛋白酶抑制劑混合物和10ul PMSF混勻,放置在冰上備用;
    2. 稱取新鮮組織,放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,用眼科剪將組織塊盡可能剪碎,然后加新配置的胞質蛋白提取液,研磨直至沒有明顯的組織塊,這個過程注意冰上操作;
    3. 將組織勻漿液移入1.5ml 預冷的EP 管中,高速渦旋振蕩5秒,4℃ 12000 g 離心10min
    4. 吸取上清至新的預冷的離心管中,即為胞質蛋白提取物;
    5. 進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗 。( 提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復凍融,避免長時間儲存)


     
     細胞胞質蛋白的提取
    1. 提取液的用量和配制:107個細胞需要0.75-1ml胞質蛋白提取液;每1ml的冷的胞質蛋白提取液中加入20ul的磷酸酶抑制劑混合物、10ul蛋白酶抑制劑混合物和10ul PMSF混勻,放置在冰上備用;
    2. 貼壁細胞:棄去培養基,加入冷的PBS清洗,棄去PBS后加入胰酶消化液消化30s-2min41200g離心10min收集細胞,再用冷的PBS清洗一次,后按細胞數加入胞質蛋白提取液,渦旋10s,放置冰上裂解10min,重復2-3次;
    3. 懸浮細胞: 4500g~800g離心10min收集細胞,再用預冷的PBS洗兩次細胞,500g~800g離心去上清。按細胞數加入胞質蛋白提取液,渦旋10s,放置冰上裂解10min,重復2-3次;
    4. 裂解完畢之后,將細胞裂解液412000g離心10min,取上清為胞質蛋白提取物;
    5. 將上清移入新的EP管中,進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。(提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復凍融,避免長時間儲存)

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Product Q&A FAQ
產品問答FAQ
  • Western Blot(WB)實驗中膠片是一片空白,是怎么回事?

    答:如果能夠排除下面的幾個問題,那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。

    1、二抗的HRP 活性太強,將底物消耗光;

    2、ECL底物中H2O2不穩定,失活;

    3、ECL底物沒覆蓋到相應位置;

    4、一抗選擇不當;

    5、二抗失活。


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