本產品的主要有效成分為經過反復優化的適量BSA、適當的去垢劑和一抗穩定試劑等,一方面能有效減少一抗的非特異性結合,另一方面能有效提升稀釋后一抗的穩定保存時間。
按照每個一抗稀釋10毫升計算,一個包裝的Western一抗稀釋液可以稀釋10個或10次一抗。
參考所用的一抗的說明,以及樣品中目的蛋白的含量,按照適當比例例如1:1000、1:500等比例稀釋一抗。一抗稀釋后即可直接用于Western。一次Western結束后,可以回收稀釋的一抗,4℃保存,以用于下次的Western。
為了能使抗體可以反復多次使用,建議盡量在4℃進行一抗和蛋白膜的結合反應,以減緩一抗的衰減速度。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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