免疫染色封閉液中含有Tris 以及適量Triton X-100等，可以通透細胞膜，經該液封閉后的細胞樣品可以檢測細胞內的目的蛋白，包括細胞漿內和細胞核內的目的蛋白。按照每個樣品需要 5-10ml 封閉液計算，本產品可以封閉 10-20 或50-100個樣品。
1. 本產品無需稀釋，開蓋即用。
2. 在樣品固定后，用洗滌液清洗一次，然后就可以滴加免疫染色封閉液進行封閉，一般封閉約 60 分鐘，也可以根據具體情況針對樣品調整封閉時間，15-120 分鐘不等，對于一些背景非常高的抗體可以 4°封閉夜。
3. 封閉時可以放在搖床上緩慢搖動來提高封閉效果；如果樣品搖動時容易脫落，也可以靜置封閉，效果略有降低，但是不影響正常封閉，能夠滿足常規需求。封閉完成后就可以直接進行后續的抗體孵育操作。
1.本產品不建議重復使用。
2.本產品可以滿足常規實驗需求，針對某些特殊的實驗需要考慮特定的封閉液。
3. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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