碳菁染料胺反應性
花青染料是一系列反應性熒光染料,廣泛用于標記肽、蛋白質、核苷酸和核酸。花青染料是具有良好水溶性的明亮熒光信號的單個家族。與熒光素和羥基香豆素不同,它們的激發和發射與 pH 值無關。在花青染料中,花青 3 染料在與蛋白質結合時熒光增強,而其他花青由于蛋白質中富電子氨基酸(如 Trp、His 和 Tyr 等)的猝滅作用而熒光減弱。
一般來說,花青染料具有以下特點:
良好的水溶性使標記反應能夠在水性介質中方便地進行,而無需使用有機溶劑(如 DMF 或 DMSO)作為助溶劑。所得偶聯物的低非特異性結合有助于檢測開發。
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答:如果能夠排除下面的幾個問題,那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強,將底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不穩定,失活;
3、ECL底物沒覆蓋到相應位置;
4、一抗選擇不當;
5、二抗失活。
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