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Super Fluor 系列（可替代Alexa Fluor 系列）熒光探針，具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，更廣的pH應(yīng)用范圍（pH 4～10）, 更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。

1) 用0.1 M NaHCO₃溶解至終濃度為2mg/mL

將1ml去離子水加入84mgNaHCO₃瓶中，配成1M的碳酸氫鈉溶液。振蕩或吹打至完全溶解。該溶液pH 約8.3，2～6℃保存可用2星期；若抗體是溶液，將抗體稀釋至2mg/mL，再加入1/10體積的上述碳酸氫鈉溶液；若抗體是凍干粉，將1M 碳酸氫鈉溶液用10倍去離子水稀釋成0.1M 后，用其將抗體溶成2mg/mL的溶液；

2）染料溶解：活化Super Flour SE染料固體粉末從冰箱放入干燥器中慢慢升至常溫后，用無水DMSO將染料配置濃度為1 mg/mL。

3）標(biāo)記：在1mL蛋白溶液中緩慢加入適量染料溶液，（蛋白:染料摩爾比=1:20～50；質(zhì)量比可在以下范圍內(nèi)優(yōu)化10～200ug Super Flour SE 每毫克IgG抗體）。同時(shí)在暗處常溫緩慢攪拌1小時(shí)。也可以直接將蛋白溶液直接加入染料的固體粉末的試劑瓶中，同時(shí)在暗處常溫緩慢攪拌1小時(shí)。

4）純化：用透析法或者葡聚糖Sephadex純化產(chǎn)品后，產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM疊氮化鈉溶液中，-20℃避光儲(chǔ)存。

5）貯存：標(biāo)記好的蛋白貯存于2～6℃，避光。若純化的蛋白偶聯(lián)物濃度小于1mg/mL，加入BSA 或其他穩(wěn)定蛋白1～10mg/ml。在2mM 疊氮鈉存在的情況下，2～6度可保存幾個(gè)月。保存更長時(shí)間，則需分裝后-20℃保存。避免反復(fù)凍融，避光保存。

對(duì)于IgG 等大多數(shù)抗體來說，摩爾吸光系數(shù)為203000，F(xiàn)/P值在4～9之間是合適。

Super Flour 647標(biāo)記蛋白F/P值計(jì)算：

1）用PBS 精確倍數(shù)稀釋定量的少許純化過的偶聯(lián)蛋白，在1cm比色皿中測定280nm和650nm的光吸收；

2）計(jì)算樣品中的蛋白濃度：蛋白摩爾濃度=(A280-(A650×0.03))×稀釋倍數(shù)/203000

3）計(jì)算標(biāo)記比例：每摩爾蛋白結(jié)合的染料摩爾數(shù)=A650×稀釋倍數(shù)/(239000×蛋白摩爾濃度)。

1. 其水溶液現(xiàn)配現(xiàn)用，不能儲(chǔ)存；

2. 任何溶解后的染料好立即使用；

3. 無水的DMSO溶液-20°C保存多2個(gè)星期。