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Super Fluor 647(效果同Alexa Fluor 647)
貨號:PMK0920
一鍵復制產品信息
價格:
3400.00
規格:
5mg
貨期:
現貨
-20°C干燥避光保存,有效期12個月
Details
產品詳情
  • 產品簡介

    Super Fluor 系列(可替代Alexa Fluor 系列)熒光探針,具有更強的熒光強度,更廣的pH應用范圍(pH 4~10), 更好的抗淬滅性。在生物熒光領域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。

  • 標記抗體

    1) 用0.1 M NaHCO3溶解至終濃度為2mg/mL

    將1ml去離子水加入84mgNaHCO3瓶中,配成1M 的碳酸氫鈉溶液。振蕩或吹打至完全溶解。該溶液pH 約8.3,2~6℃保存可用2星期;若抗體是溶液,將抗體稀釋至2mg/mL,再加入1/10體積的上述碳酸氫鈉溶液;若抗體是凍干粉,將1M 碳酸氫鈉溶液用10倍去離子水稀釋成0.1M 后,用其將抗體溶成2mg/mL的溶液;

    2)染料溶解:活化Super Flour SE染料固體粉末從冰箱放入干燥器中慢慢升至常溫后,用無水DMSO將染料配置濃度為1 mg/mL。

    3)標記:在1mL蛋白溶液中緩慢加入適量染料溶液,(蛋白:染料摩爾比=1:20~50;質量比可在以下范圍內優化10~200ug Super Flour SE 每毫克IgG抗體)。同時在暗處常溫緩慢攪拌1小時。也可以直接將蛋白溶液直接加入染料的固體粉末的試劑瓶中,同時在暗處常溫緩慢攪拌1小時。

    4)純化:用透析法或者葡聚糖Sephadex純化產品后,產品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM疊氮化鈉溶液中,-20℃避光儲存。

    5)貯存:標記好的蛋白貯存于2~6℃,避光。若純化的蛋白偶聯物濃度小于1mg/mL,加入BSA 或其他穩定蛋白1~10mg/ml。在2mM 疊氮鈉存在的情況下,2~6度可保存幾個月。保存更長時間,則需分裝后-20℃保存。避免反復凍融,避光保存。

  • 計算標記比例F/P值

    對于IgG 等大多數抗體來說,摩爾吸光系數為203000,F/P值在4~9之間是合適。

    Super Flour 647標記蛋白F/P值計算:

    1)用PBS 精確倍數稀釋定量的少許純化過的偶聯蛋白,在1cm比色皿中測定280nm和650nm的光吸收;

    2)計算樣品中的蛋白濃度:蛋白摩爾濃度=(A280-(A650×0.03))×稀釋倍數/203000

    3)計算標記比例:每摩爾蛋白結合的染料摩爾數=A650×稀釋倍數/(239000×蛋白摩爾濃度)。

  • 注意事項

    1. 其水溶液現配現用,不能儲存;

    2. 任何溶解后的染料好立即使用;

    3. 無水的DMSO溶液-20°C保存多2個星期。

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Product Q&A FAQ
產品問答FAQ
  • Western Blot(WB)實驗中膠片是一片空白,是怎么回事?

    答:如果能夠排除下面的幾個問題,那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。

    1、二抗的HRP 活性太強,將底物消耗光;

    2、ECL底物中H2O2不穩定,失活;

    3、ECL底物沒覆蓋到相應位置;

    4、一抗選擇不當;

    5、二抗失活。


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