乳酸脫氫酶(LDH)是一種氧化還原酶(EC1.1.1.27),廣泛存在于各種生物體中。它催化丙酮酸和乳酸相互轉化,同時伴隨著NADH 和NAD+的相互轉化。在缺氧條件下,它將糖酵解的終產物丙酮酸轉化為乳酸。LDH 定量是有臨床意義的,因為某些LDH同工酶的血清水平反映了特定組織中的病理條件。當疾病、傷害或有毒物質損害組織時,細胞的乳酸脫氫酶釋放到血液中。由于乳酸脫氫酶是一種相當穩定的酶,因此它已被廣泛用于評估組織和細胞的損傷和毒性。本試劑盒提供了一種簡單、簡便的微量法,用于測定動植物組織、細胞、血清(漿)和其他生物液中的乳酸脫氫酶。原理是LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與 2,4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,在520 nm 處有大吸收峰。在一定的濃度范圍內, 丙酮酸含量與 520 nm 吸光度成正比,根據標準曲線,可計算出樣品中丙酮酸含量,進而反映LDH活性。
酶標儀或可見光分光光度計(能測520nm處的吸光度)
恒溫箱、制冰機、低溫離心機
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
1. 實驗過程中請穿戴實驗服、口罩和乳膠手套。請按照生物實驗室的國家安全規定進行實驗,尤其是在檢測血樣或其他體液時。
2. 本試劑盒僅用于實驗室科學研究,如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途,我們將不對任何后果負責。
3. 本試劑盒應在有效期內使用,并請嚴格按照說明書進行存儲。
4. 不同批次號、不同廠家之間的組分不要混用;否則,可能導致結果異常。
5. 勤換吸頭,避免各組分之間的交叉污染。
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答:如果能夠排除下面的幾個問題,那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強,將底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不穩定,失活;
3、ECL底物沒覆蓋到相應位置;
4、一抗選擇不當;
5、二抗失活。
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