NADH氧化酶(NOX, EC 1.6.99.3)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應密切相關。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法檢測生物樣本中NADH氧化酶(NOX)的活性水平。其原理是NOX能夠將NADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(DCPIP)的還原相偶聯,藍色的DCPIP被還原為無色的DCPIP,在600nm下測定藍色DCPIP的還原速率計算出NOX的活性。
酶標儀或可見分光光度計(能測600nm處的吸光度)及恒溫箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
低溫離心機、制冰機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液體積和洗滌次數;
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜,可以調整電極和加樣;
4、封閉物用量不足,可以提高封閉物濃度,孵育時保證封閉液完全浸沒轉印膜;
5、封閉物使用不當,比如檢測生物素標記的蛋白時不可用脫脂奶粉封閉;
6、封閉時間不夠,一般情況下室溫37度封閉1小時以上或者4度封閉過夜;
7、抗體非特異性結合,可以降低抗體濃度,減少孵育時間;
8、一抗稀釋度不適宜,可以對抗體進行滴度測試,選擇適宜的抗體稀釋度;
9、一抗孵育的溫度偏高,建議4℃結合過夜;
10、抗體濃度過高或洗滌不夠,建議降低抗體濃度,增加洗滌次數和時間;
11、化學顯色底物過多,建議按說明書加入適量的顯色底物。
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