動植物及微生物的細胞內外都存在明顯的Na+、K+梯度差,細胞內是高K+低Na+,細胞外則是高Na+低K+,這顯然是Na+、K+逆濃度梯度主動運輸的結果,執行這種運輸功能的體系稱為Na+K+-離子泵,它利用水解ATP獲取能量,推動K+吸收和Na+的排出,因此又叫Na+K+-ATP泵或Na+K+-ATP酶。Na+K+-ATP酶(Na+K+-ATPase)是一種廣泛分布于機體內生物膜系統的酶,在細胞生理學中發揮多種功能,可催化ATP水解生成ADP和無機磷。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法檢測生物樣本中Na+K+-ATPase的活性水平。其原理是樣本中存在的Na+K+-ATPase分解ATP生成ADP及無機磷,通過測定生成的無機磷的量可確定Na+K+-ATPase活性。
試劑盒組分 | 規格 | 儲存條件 | |
48T | 96T | ||
提取液 | 50mL | 100mL | 4℃ |
反應緩沖液 | 5mL | 10mL | 4℃ |
試劑一 | 1 | 1 | -20℃避光保存 |
試劑二 | 1mL | 2mL | 4℃ |
試劑三 | 1 | 1 | 4℃避光保存 |
試劑四 | 1 | 1 | 4℃避光保存 |
試劑五 | 1 | 1 | 4℃避光保存 |
試劑六 | 25mL | 25mL | 4℃ |
試劑七 | 5mL | 10mL | 4℃ |
酶標儀或可見光分光光度計(能測660nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
制冰機、低溫離心機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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