蔗糖是源(葉片等)光合產物向“庫”器官運輸的主要形態。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是雙向反應酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代謝的關鍵酶之一。其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG與果糖,參與淀粉、纖維素和半纖維素的合成等代謝途徑。研究其分解方向 SS-Ⅰ的活性對于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。本試劑盒提供了一種檢測SS-I活性的便捷方法,其原理是SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG,果糖與3,5-二硝基水楊酸反應生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質,通過測定540nm 處吸光值變化可計算得 SS-I活性。
酶標儀或可見光分光光度計(能測540nm處的吸光度)
水浴鍋、制冰機、低溫離心機
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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