過(guò)氧化物酶(POD,EC 1.11.1.7)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可催化過(guò)氧化氫氧化酚類(lèi)和胺類(lèi)化合物,具有消除過(guò)氧化氫和酚類(lèi)、胺類(lèi)毒性的雙重作用。本試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法,用于分析生物樣品中POD的活性。其原理是POD催化H2O2氧化特定底物生成有色物質(zhì),在460nm有特征光吸收。可以檢測(cè)植物、細(xì)菌、細(xì)胞、血清等樣本。
酶標(biāo)儀或可見(jiàn)分光光度計(jì)(能測(cè)460nm處的吸光度)及恒溫培養(yǎng)箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器(組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對(duì),不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調(diào)整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長(zhǎng)孵育時(shí)間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進(jìn)行混合,如果不顯色則說(shuō)明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關(guān)文獻(xiàn)確定;
5、標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照比對(duì)結(jié)果,增加標(biāo)本上樣量。
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