丙酮酸激酶(Pyruvate Kinase, PK, EC 2.7.1.40)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化糖酵解過程中的后一步反應,是糖酵解過程中的主要限速酶之一,也是產生ATP的關鍵酶之一,因此測定PK活性具有重要意義。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法,用于檢測生物樣本中PK的活性。其原理是PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脫氫酶進一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,NADH在340nm有特征吸收峰,而NAD+沒有,通過測定340nm光吸收下降速率,即可反映PK活性。
酶標儀或紫外分光光度計(能測340nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔UV板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭
低溫離心機、制冰機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
更新中...
答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
Copyright ?湖北普美生物科技有限公司 All Rights Reserved. 工信部備案:鄂ICP備17001029號-1 技術支持:武漢微盟