丙酮酸脫氫酶(PDH;EC 1.2.4.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,分布在線粒體基質中,是由三個酶組合的復合體,負責催化丙酮酸脫羧,生成乙酰輔酶A的不可逆反應。PDH是丙酮酸脫氫酶復合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫羧生成羥乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循環連接起來。本試劑盒提供了一種簡單、方便、快速的PDH活性檢測方法,其原理是PDH催化丙酮酸脫氫,同時還原WST-8產生黃色物質,從而導致450nm光吸收的增加。通過檢測450nm吸光值的增加既可計算PDH活性。
酶標儀或分光光度計(能測450nm處的吸光度)
96孔板或微量比色皿、可調節式移液槍及槍頭
水浴鍋、制冰機,低溫離心機
去離子水
勻漿器
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答:可能的原因包括培養基質量、血清質量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有:
1. 使用高質量的培養基和血清,確保其無菌、無支原體污染,并保證在保質期內使用;
2. 培養箱溫度和氣體比例要保持穩定,定期校準;
3. 每天檢查并記錄細胞培養的環境參數,如溫度、pH值、氣體比例等,以便及時發現問題;
4. 定期更換培養基,保持細胞營養充足;
5. 對于生長緩慢的細胞株,可以嘗試進行克隆篩選或更換培養基。
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