本產(chǎn)品主要成分為Tris-base 、甘氨酸和SDS。本產(chǎn)品的使用非常簡單，只需將您使用的常規(guī)TG電泳緩沖液系統(tǒng)更換為本產(chǎn)品的稀釋液，調(diào)整電壓后進(jìn)行電泳即可，無需添加任何實驗步驟。同時稀釋為工作液的本產(chǎn)品可重復(fù)使用4-5次。本產(chǎn)品既可節(jié)省您寶貴的時間也可降低您的實驗成本。
a. 取100ml Western快速電泳緩沖液(10×)倒入到潔凈的量筒中，加入蒸餾水、超純水或去離子水900ml。
b.用蒸餾水、超純水或去離子水定容到1升，混勻后即為Western快速電泳緩沖液。
c.電泳完成后收集電泳槽內(nèi)、外槽電泳液，4℃保存，可重復(fù)使用4-5次，但如發(fā)生渾濁請勿使用。
d.應(yīng)用本產(chǎn)品所進(jìn)行的SDS-PAGE的結(jié)果顯示，本產(chǎn)品的應(yīng)用會使蛋白的分辨范圍發(fā)生變化，同等濃度的凝膠，其分辨的分子量要小于使用TG電泳緩沖液，因此在選擇凝膠濃度時請適當(dāng)參照下表，可在一定程度.上有效選擇凝膠濃度進(jìn)行電泳。
1.本產(chǎn)品為10倍濃縮液，使用時用純水10倍稀釋后配制成工作液(例如:取100 ml本產(chǎn)品后用純水定 容至1 L)
2.將適量的本產(chǎn)品加入到電泳槽的內(nèi)、外槽中, 調(diào)整電源為恒壓200-250 V進(jìn)行電泳。電泳指示劑溴酚藍(lán)至凝膠底部，所需時間約20- 30 min。
3.本產(chǎn)品中含有SDS，是為變性膠電泳設(shè)計的，對于不含SDS的天然膠電泳不適用。
4.對人體有害，操作時請務(wù)必帶手套。如濺到皮膚上，請立即用大量水沖洗。
5.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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