磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline,簡稱 PBS)是常用的用于生物學研究的一個緩沖溶液。PBS緩沖液有助于保持恒定的pH值,其滲透壓和離子濃度通常與人體pH相近(等滲),本產品pH為7.2-7.4,溶解后濃度0.01M。本產品主要成分為氯化鈉 137 mM 磷酸氫二鈉 10 mM 磷酸二氫鉀 1.76mM 氯化鉀 2.7 mM。每袋PBS干粉徹底溶解于2000mL雙蒸水中即可使用。
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
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