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IHC實驗中高背景
1、沒有對非特異性結合進行封閉或封閉不充分;
2、一抗濃度可能過高;
3、孵育溫度可能過高;
4、二抗可能存在非特異性結合;
5、組織洗滌不充分;仍然存在固定劑;
6、內源性過氧化物酶具有活性;
7、固定步驟導致自發熒光(如果使用熒光檢測);
8、組織內自發熒光(如果使用熒光檢測);
9、信號放大過多(間接檢測技術);
10、底物過多(酶檢測);
11、色原與組織樣品中存在的PBS反應(酶檢測)。
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IHC實驗中組織形態不清晰或受損
1、抗原修復方法可能過于苛刻;
2、組織可能未充分固定;
3、組織切片從載玻片上脫落(冰凍切片);
4、組織切片撕裂或折疊,或切片下方可見氣泡;
5、組織形態難以分辨;
6、組織自溶。