JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm 的理想熒光探針。可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時,JC-1聚集在線粒體的基質中,形成聚合物,可以產生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時,JC-1不能聚集在線粒體的基質中,此時JC-1為單體,可以產生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。
線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降,同時也可以用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。
JC-1單體的大激發波長為514nm,大發射波長為529nm;JC-1聚合物的大激發波長為585nm,大發射波長為590nm。實際觀察時,使用常規的觀察紅色熒光和綠色熒光的設置即可。
JC-1用于檢測細胞的線粒體膜電位時常用的濃度范圍為1~20μg/mL,對于很多細胞適宜采用的JC-1濃度為10μg/mL。
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1、可選擇孔徑0.22um的PVDF膜或者NC膜,轉膜時間縮短,另外可采用Tricine-SDS-PAGE體系;
2、也可以選擇PSQ 膜,同時縮短轉移時間。也可以將兩張膜疊在一起,再轉移。其他按步驟即可。
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