啥是ELISA?
說起ELISA可能很多童鞋都略有耳聞，但真正詳細了解的不多。我們今天就來聊聊ELISA這個話題。
ELISA簡介
ELISA是Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay的簡稱，即酶聯免疫吸附測定，是研究蛋白抗體的重要方法。1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay, ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。
ELISA（圖片來源：網絡）
自從上世紀70年代提出ELISA技術以來，ELISA已經滲透到各種科學研究中，并成為生物醫藥研發領域不可或缺的經典技術。ELISA是一種強大的免疫測試方法，通過酶反應催化來表現抗原抗體結合的定量分析，被用來鑒定肽，蛋白，抗體以及激素等等，過去數十年憑借較高的靈敏度與高通量性一直坐穩治療性抗體藥物定量分析的“頭把交椅”。
這項技術以96孔板的形式被許多公司開發成試劑盒，如Thermo Fisher，Boster以及Abcam等等，孔表面包被有特定的捕捉抗體或抗原來結合特異性的分析物，待加入底物后，發生催化反應產生特定的信號來檢測分析物的水平。
歷史發展
ELISA的發展起點要追溯到RIA（radioimmunoassay）的歷史，Yalow和Berson在1960s次使用碘標記的RIA技術來測定內源血漿中的胰島素水平，然而放射性實驗安全風險太高，不適合進行大面積推廣應用，這時候一些科學家便想用生物酶來代替放射性標記，但如何將酶與抗體或抗原連接而不影響彼此的生物活性成為了必須要捅破的窗戶紙，盡管在當時被普遍認為是不可能的實驗，Perlmann和Schuurs還是在1966年力證了酶連接的免疫試驗是可行的，直到1971年，Perlmann和Schuurs兩個研究組幾乎同時發表了ELISA的文獻，向世人系統性的介紹了ELISA的方法，此后，ELISA經歷迅速的，直接開啟了商業臨床和醫療診斷的應用。
ELISA的原理
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
進行檢測時，樣品中的受檢物質（抗原或抗體）與固定的抗體或抗原結合。通過洗板除去非結合物，再加入酶標記的抗原或抗體，此時，能固定下來的酶量與樣品中被檢物質的量相關。通過加入與酶反應的底物后顯色，根據顏色的深淺可以判斷樣品中物質的含量，進行定性或定量的分析。
由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的靈敏度。
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。這種測定方法中有3種必要的試劑：
1. 固相的抗原或抗體；
2. 酶標記的抗原或抗體；
3. 酶作用的底物。
ELISA的四種主要類型
根據試劑的來源和標本的性狀及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的ELISA檢測方法。
雙抗體夾心法測抗原
針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體。適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。
雙抗體夾心法ELISA（圖片來源：網絡）
競爭法測抗原
首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經洗滌后分成兩組：一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標記抗原，經孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。此方法測定的抗原只要有一個結合部位即可，對小分子抗原如激素和藥物類的測定常用此法。優點是快，缺點是需要較多量的酶標記抗原。
競爭法ELISA（圖片來源：網絡）
3. 直接法ELISA：
這是Perlmann早建立的ELISA方法，通常用于檢測分子量比較大的抗體或抗原，以及抗體篩選和抗原表位作圖，這個模式比較簡單，將抗原包裹在孔中，加入酶連接的特異性抗體，靶向固定化的抗原，成為牢固的復合體，洗去結合不緊密的抗體或背景蛋白后，加入合適的底物量，孵育使其發生特定的酶反應催化，產生顯色反應，通過檢測熒光信號來定量分析物。
直接法ELISA（圖片來源：網絡）
4. 間接法ELISA測抗體
由于受到直接法ELISA方法的鼓舞，Lindstr?m和Wager在1978年發表了間接法ELISA方法，之所以叫間接法ELISA方法，是因為相對于間接法ELISA，它引入了第二個抗體來進行檢測，與直接法ELISA不一樣的是，它通過使用一抗能結合多個二抗，從而放大了檢測靈敏度，就好像在一個黑暗的房間，直接法ELISA只有一個50W的燈泡，而間接法ELISA能接上兩個50W的燈泡，這樣房間的亮度是不一樣的。間接法ELISA是檢測抗體常用的方法，原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體。
本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標抗體檢測各種與抗原相應的抗體。主要用于對病原體的檢測而進行傳染病的診斷。
間接法ELISA（圖片來源：網絡）
除了這4種常見的方法，ELISA還有用于測定血清中某類抗體亞型的捕獲包被法等特殊變種。
總結
ELISA試劑盒給測定不同生物流體樣品中的抗原或抗體含量提供了極大的便利，可選擇度高，使用起來也非常簡便，兼顧高靈活性以及高靈敏度。根據新的研究統計表明，ELISA全球銷售額逐年增長，我們非常欣喜的看到這項技術仍在不斷進步，其銷量攀升的同時，我們也在目睹生物醫藥的強勢崛起，未來必將造福更多的病患。
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