本辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-labeled Streptavidin)也稱HRP-Streptavidin、Streptavidin-HRP或辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素，為進(jìn)口分裝，可以用于生物素(Biotin)標(biāo)記的抗體、核酸、蛋白或其它生物素標(biāo)記分子的檢測。具體用途包括Western、ELISA、免疫組化或免疫細(xì)胞化學(xué)、原位雜交、Southern、Northern、EMSA等。
本HRP-Streptavidin用高純度的Streptavidin和超純的辣根過氧化物酶交聯(lián)而成，確保產(chǎn)生低的本底和高的靈敏度。本產(chǎn)品的濃度為1mg/ml。
Streptavidin的分子量為66kD，可以高度特異性地和生物素(Biotin)結(jié)合。Streptavidin和生物素的親和常數(shù)為 Kd=10-15M。Streptavidin是一個4聚體蛋白，可以同時結(jié)合4個生物素分子。Streptavidin的中文名為鏈霉親和素，從Streptomyces adidinii中純化獲得，和雞蛋清來源的Avidin(親和素)在空間結(jié)構(gòu)以及與生物素的親和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同是，Streptavidin是一種非糖基化蛋白，并且基本不帶電荷。Avidin的pI=～10.5，在中性pH條件下呈堿性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性條件下不帶電荷，因此Streptavidin的非特異性結(jié)合比Avidin低很多，這樣檢測時的非特異性背景就低很多。因此目前在生物素檢測時通常使用Streptavidin替代Avidin。
辣根過氧化物酶即horseradish peroxidase(HRP)，可以在Western、EMSA、Southern或Northern等檢測時催化ECL類試劑(如ECL、BeyoECL等)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，可以在ELISA時催化TMB產(chǎn)生藍(lán)色，也可以在免疫組化、免疫細(xì)胞化學(xué)或Western blot檢測時催化DAB產(chǎn)生棕色沉淀。
本辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin用于各種常規(guī)用途的推薦稀釋比例參考下表，實(shí)際實(shí)驗(yàn)操作過程中需根據(jù)具體情況適當(dāng)調(diào)節(jié)辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin的稀釋比例。對于Western，推薦的稀釋范圍為1:2000-10000。
WB | IHC/IC/ISH | ELISA | Southern/Northern | EMSA |
1:2000-10000 | 1:200-500 | 1:2000-10000 | 1:2000-5000 | 1:2000-5000 |
WB,Western blot; IHC, Immunohistochemistry; IC, Immunocytochemistry; ISH, in situ hybridization.
本產(chǎn)品如果用于常規(guī)的Western檢測，以每次檢測需10毫升1:2000稀釋的本產(chǎn)品計(jì)，可以檢測40次。
（1）疊氮鈉會抑制辣根過氧化物酶的活性，在含有辣根過氧化物酶的溶液中不可加入疊氮鈉。
（2）本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
（3）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點(diǎn)，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息，通過去修飾確定蛋白實(shí)際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強(qiáng)，建議使用特異性強(qiáng)的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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