非洲人性功能强大跟什么有关?,18禁激情韩国,免费人成网站线观看含羞,天美传奇MV免费观看完整版

Cy5.5 是一種 CY 染料。CY 為花菁 (Cyanine) 的縮寫，是由奇數個甲基單位連接的兩個氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長長、吸收和發射可調、消光系數高、水溶性好、合成相對簡單等特點。CY 系類染料常被用于蛋白，抗體以及小分子化合物的標記，對于蛋白抗體的標記，可以通過簡單的混合反應來完成結合，以下我們介紹了蛋白抗體標記的標記方法，具有一定的參考意義。

1. 蛋白準備
為了獲得佳標記效果，請將蛋白 (抗體) 濃度配制為 2 mg/mL。
1) 蛋白溶液 pH 值應為 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，則用 1 M 碳酸氫鈉進行調整。
2) 若蛋白濃度低于 2 mg/mL，標記效率會大大降低，為了獲得佳標記效率，建議終蛋白質濃度范圍為 2-10 mg/mL。
3) 蛋白必須在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和銨離子的緩沖液中，否則會影響標記效率。
2. 染料準備
將無水 DMSO 稀釋 CY 染料，制成 10 mM 儲備溶液。通過玻璃管或旋渦充分混合。
注：CY 儲存液建議分裝后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。
3. 染料工作液用量計算
標記反應所需的 CY 染料用量取決于要標記蛋白的用量，CY 染料與蛋白的佳摩爾比為 10 左右。
例：假如所需標記蛋白為 500 μL 2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000)，用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg CY 染料，則所需 CY 體積為 3.95 μL，詳細計算流程如下(以CY3-NHS ester為例)  ：
1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG) ×mL (IgG) / MW (IgG) =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol
2) mmol (CY3-NHS ester) = mmol (IgG) ×10 =6.7×10-6 mmol×10 = 6.7×10-5 mmol
3) μL (CY3-NHS ester) = mmol (CY3-NHS ester) ×MW (CY3-NHS ester) / mg/μL (CY3-NHS ester) = 6.7×10-5 mmol× 590.15 mg/mmol / 0.01 mg/μL =3.95 μL (CY3-NHS ester)。

1. 標記反應
1) 取算好體積的新鮮配制的 10 mg/mL CY 染料緩慢加入到 0.5 mL 蛋白樣品溶液中，輕輕搖勻混合，然后短暫離心將樣品收集在反應管底部。切忌劇烈混勻，防止蛋白樣品變性失活。
2) 將該反應小管置于避光處，在室溫條件下輕輕搖晃孵育 60 分鐘，每隔 10–15 分鐘，將反應小管輕輕顛倒幾次，以充分混合兩種反應物，提高標記效率。
2. 蛋白純化脫鹽

以下方案是使用 SepHadex G-25 柱純化染料蛋白偶聯物為例。
1) 制備 SepHadex G-25 柱。
2) 將反應混合物裝入 SepHadex G-25 色譜柱頂部。
3) 當樣品運行到頂部樹脂表面下方時，立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
4) 向所需樣品中加入更多的 PBS (pH 7.2-7.4)，完成柱純化。結合含有所需要的染料-蛋白質綴合物的組分。