非洲人性功能强大跟什么有关?,18禁激情韩国,免费人成网站线观看含羞,天美传奇MV免费观看完整版

3.12-200ng/mL

1.58ng/mL

板內變異系數<10%，板間變異系數<12%

范圍從 90%到 102%，平均回收率 96%

檢測具有高靈敏度和優良的特異性。未觀察到和人脂蛋白α(Lp-α)類似物之間的顯著交叉反應或干擾。

血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清和其他生物體液

該試劑盒采用雙抗夾心酶聯免疫吸附法原理。酶標板預包被親和純化的抗人Lp-α的抗體。將含有人Lp-α的樣品或標準品加入到酶標板中，與包被抗體反應。再加入生物素標記的檢測抗體，并與酶標板上捕獲的人Lp-α結合。接著，加入鏈霉親和素-辣根過氧化物酶（SA-HRP）以形成固相抗體-人Lp-α生物素標記抗體-SA-HRP 的夾心復合物。然后，將TMB溶液加入孔中并進行孵育，酶促反應產生藍色物質，加入終止液后，變成黃色。在 450nm波長下測定吸光值。后通過建立標準曲線，根據 OD 值來計算樣品中人Lp-α的濃度。

酶標儀（能測 450nm 處的吸光度）

多通道移液器或自動洗板機

恒溫箱、低溫離心機

可調節式移液槍及槍頭

去離子水

注意：各組分（小管試劑）開蓋前，請先低速離心。

1.使用前將所有試劑平衡至室溫(18-25℃)。按照酶標儀說明書進行設置檢測波長為450nm，并在讀板前預熱 15 分鐘。

2.洗滌液:取濃縮洗滌液，根據檢測數量，用去離子水或蒸餾水1：20稀釋，混勻后備用。

3.檢測試劑 A 工作液：實驗前計算所需量(100 μL/孔)。在準備工作中，應該準備比計算量稍微多一點（多 100-200μL）。使用前將原液管離心，用通用稀釋液將 100×濃縮檢測試劑 A 稀釋至 1×工作液（如：10μL 檢測試劑 A + 990μL 通用稀釋液）。

4.檢測試劑 B 工作液：實驗前計算所需量(100 μL/孔)。在準備工作中，應該準備比計算量稍微多一點（多 100-200μL）。使用前將原液管離心，用通用稀釋液將 100×濃縮檢測試劑 B 稀釋至 1×工作液（如：10μL 檢測試劑 B + 990μL 通用稀釋液）。

5.標準工作液：首先，標準品 1000×g 離心1min，加入1mL 通用稀釋液，使其靜止10min 再輕柔混勻，這就是200ng/mL 工作儲備液,然后取7個 EP 管，每管內加入500μL通用稀釋液。吸取 500μL 200ng/mL 標準品稀釋液到個管內再混勻即為100ng/mL工作液。按照下表將500μL的溶液從前管移到后管中。在下一次轉移前，將每管徹底混勻。設定7個梯度稀釋標準品如 200ng/mL,100ng/mL,50ng/mL，25ng/mL，12.5 ng/mL,6.25ng/mL,3.12ng/mL，后1個裝有通用稀釋液的 EP 管是空白對照作為0ng/mL。

注意：每次實驗，請使用新配制的標準品，工作儲備液可2-8℃保存一周。

血清：讓血樣在室溫下凝結 2 小時或在 2-8℃下過夜，然后在 2-8℃下 2000× g 離心 15 分鐘。隨后立即取上清液進行檢測，或存儲在-20℃或-80℃備用。

血漿：使用 EDTA 或肝素作為抗凝劑收集血漿。采集后 30 分鐘內，在 2-8℃,2000×g 條件下離心樣品 15 分鐘，隨后立即取上清液進行檢測，或存儲在-20℃或-80℃下備用。

組織勻漿：應在預冷的 PBS 中沖洗組織，徹底清除多余的血液，稱重，切成小塊。然后在冰上的采用玻璃勻質器在 PBS（組織重量（g）：PBS（mL）體積=1：9）中均質化組織塊。使用超聲波細胞破碎機對所得勻質懸浮液進行超聲處理，直到溶液澄清。然后將勻漿在 10000×g 下離心 5 分鐘。隨后立即取上清液進行檢測，或存儲在-20℃或-80℃下備用。

細胞裂解物：對于粘附細胞，用適量預冷的 PBS 輕輕清洗細胞，并用胰蛋白酶分離細胞。以 1000×g 離心 5 分鐘收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集）。棄上清，用冷 PBS 清洗細胞 3 次。以濃度為5×10⁶ 個細胞/1mL 預冷 PBS 重新懸浮細胞。重復凍融數次，直到細胞完全溶解。1500×g，2-8℃離心 10min。隨后立即取上清液進行檢測，或存儲在-20℃或-80℃下備用。

細胞培養上清和其他生物體液：在 1500×g，2-8℃條件下離心樣品15分鐘。隨后立即取上清液進行檢測，或存儲在-20℃或-80℃下備用。

注意：不要使用嚴重溶血或脂血的標本。如果樣品要在6天內使用，則可以將其儲存在2-8℃，長期保存需分裝存儲在-20℃或-80℃，避免反復凍融。測定前，應將冷凍樣品緩慢升至室溫并輕輕混合。實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本用通用稀釋液稀釋幾個不同倍數做預實驗確定合適的稀釋倍數，計算結果乘以稀釋倍數。

1.將標準工作溶液加入前兩列，每個濃度設置一個復孔(每孔 100μL)。將樣品加入其他孔中(每孔 100μL)。蓋上試劑盒提供的封板膜。37℃孵育 60 分鐘。

2.棄去每孔中的液體，不洗板立即向每孔中加入100μL 的檢測試劑A工作液。蓋上封板膜。37℃孵育60 分鐘。

3. 手工洗板：棄去每孔中的液體，每孔加入350μL洗滌液。浸泡30秒再倒出每孔中液體并在干凈的吸水紙上拍干。重復這個洗滌步驟，共3遍。洗板機洗板：選擇洗滌3次程序洗板后拍干。

4.向每孔中加入 100μL 的檢測試劑 B 工作液。蓋上封板膜。37℃孵育 30 分鐘。

5.棄去每孔中的液體，重復步驟 3 的洗滌過程5遍。

6.每孔加入 90μL 的TMB試劑。蓋上新的封板膜。37℃避光孵育 10-20 分鐘（當標品濃度梯度后三孔有明顯藍色梯度，前三孔的梯度不明顯時即可終止）。

7.每孔加入 50μL 的終止液，順序與加入底物溶液(TMB)的順序一致，輕輕晃動混勻。

8.確保酶標板孔底無氣泡水霧等，立即在450nm 測量每孔的吸光度 OD 值。

每個標準品和樣品的重復讀數分別取平均值，然后減去零孔 OD 的平均值。以x 軸為 OD 值，y 軸為標準品濃度。擬合一條標準曲線，將樣本減去零孔后的OD值作為x帶入計算y（濃度） 。如果樣品被稀釋，從標準曲線上讀出的濃度必須乘以稀釋系數。

典型標準曲線（R²≥0.99）

人脂蛋白α(Lp-α)標準曲線。數據和曲線僅供參考，實驗者需根據自己的實驗建立標準曲線

1. 實驗過程中請穿戴實驗服、口罩和乳膠手套。請按照生物實驗室的國家安全規定進行實驗，尤其是在檢測血樣或其他體液時。終止液有一定的腐蝕性，操作時請做好防護措施。

2. 本試劑盒僅用于實驗室科學研究，如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途，我們將不對任何后果負責。

3. 本試劑盒應在有效期內使用，并請嚴格按照說明書進行存儲。收到試劑盒后，未開封的試劑盒可在2-8℃下保存1個月。如果試劑盒在1個月內不使用，請在收到試劑盒后，將每個組件分別存放在上表中指示的溫度下。

4. 新打開的ELISA酶標板可能含有水霧樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果產生任何影響。未用完的板條應立即放回裝有干燥劑的鋁箔袋中，重新密封并在-20℃下存儲。

5. 不同批次號、不同廠家之間的組分不要混用；否則，可能導致結果異常。

6. 勤換吸頭，避免各組分之間的交叉污染。

7. 溶解含有蛋白質溶液時，應始終避免起泡。

8. 不得重復使用稀釋后的工作液。

9. 為了得到準確的實驗結果，在孵育過程中，必須確保封板膜將酶標板密封。

10. 在使用自動洗板機時，添加清洗緩沖液后，在清洗步驟之間添加30秒的浸泡時間可提高分析精度。

11. 底物溶液保存過程中應為無色，加入到酶標板中之后底物溶液應從無色變為漸變藍色。

12. 終止液應按照與加底物溶液(TMB)相同的順序添加到酶標板中。添加終止液后，孔中溶液的顏色將從藍色變為黃色。綠色的孔表明終止液未與底物溶液充分混合，應輕拍孔板使其混勻。